痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠免疫功能影响的研究

目的研究痰热清注射液对流感病毒(FM1)感染小鼠的免疫功能和肺组织中细胞因子以及肺组织炎症反应的作用。方法采用流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)制备小鼠肺感染模型,观察痰热清注射液对FM1感染小鼠肺组织匀浆中细胞因子IFNγ-、IL-4和TNF-α的含量,以及T、B淋巴细胞的增殖功能和T淋巴细胞产生IL-2的能力。结果痰热清注射液不仅具有显著增强FM1感染小鼠T、B淋巴细胞的功能和提高小鼠肺组织匀浆中IFN-γ和IL-4的含量,而且还能显著抑制肺组织匀浆中TNF-α的含量。结论痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠的免疫功能和肺组织中细胞因子具有明显的调节作用和抑制肺组织炎症反应的作用。     

冬虫夏草提取液抑制破骨细胞分化与缓解去卵巢小鼠骨量流失的研究

目的 探讨冬虫夏草提取液（Cordyceps sinensis extract,CSE）对去卵巢小鼠骨量流失的保护作用以及对核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）诱导的破骨细胞分化及其功能的影响。方法 从C57BL/6小鼠骨髓中提取巨噬细胞（bone marrow-derived macrophages,BMMs）;在破骨细胞分化过程中,加入CSE干预处理,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP）染色分析破骨细胞数量;将接近成熟的破骨细胞种于羟基磷灰石板,观测骨陷窝面积;使用DAPI和鬼笔环肽对破骨细胞肌动蛋白环（F-actin）进行染色,观测环内细胞核数量和环形态;使用q-PCR检测DC-STAMP、ATP6V0d2、TRAP、CTSK、NFATc1的表达;使用Western blot检测MAPK通路蛋白的表达;构建去卵巢小鼠,每天灌胃给予CSE,治疗6周取小鼠股骨进行形态学分析以及ELISA检测外周血中骨碱性磷酸酶（bone alkaline p...     

低剂量辐射对裸鼠移植人胶质瘤(U251)细胞凋亡的影响

目的：探讨低剂量辐射对裸鼠移植人胶质瘤U251细胞凋亡的影响。方法：35只荷人胶质瘤U251裸鼠,随机分为7个实验组(每组5只),即假照组(0 mGy),D₁组(75 mGy),D₂组(4Gy),D₁-12 h+D₂组(D₁照射后12 h给予D₂),D₁-24 h+D₂组(D₁照射后24 h给予D₂),D₁-48 h+D₂组(D₁照射后48 h给予D₂)和D₁-72 h+D₂组(D₁照射后72 h给予D₂)。各实验组以不同方式照射后4 d,荷瘤裸鼠全部处死,采用TUNEL法检测裸小鼠移植人胶质瘤组织的细胞凋亡。结果：D₁（75 mGy）照射后,细胞凋亡指数（AI）增至(0.19±0.07),但与假照组（0.17±0.07）比较差异无显著性（P＞ 0.05）。D₂（4 Gy）组、D₁+D₂各组细胞凋亡指数均明显增加,分别为0.54±0.05、0.64±0.04、0.63±0.04、0.65±0.11及0.67±0.07,与假照组比较差异均具有显著性（P＜0.01）。与D₂组比较,D₁+D₂各组细胞凋亡指数增加更为明显,两者比较差异均具显著性（P＜0.05）。结论：75 mGy照射对胶质瘤细胞凋亡可能有一定程度的影响,低剂量辐射与大剂量辐射有协同促胶质瘤细胞凋亡的作用。     

3D回旋仪模拟微重力效应对小鼠骨骼和 心脏的影响

目的：利用3D 回旋仪模拟微重力效应探究对小鼠骨骼和心脏的影响。方法：25 只8 周龄雄性C57BL/6J 小鼠,随机分成5 组（n=3~5）：地面对照组（GC 组）,3 周处理对照组（TC3 组）,3 周模拟微重力组（SM3 组）,6 周 处理对照组（TC6 组）,6 周模拟微重力组（SM6 组）。使用Micro-CT 检测小鼠左股骨参数变化。采用超声方法检 测小鼠心脏结构和功能的变化。结果：与GC 组相比,TC3 组、SM3 组、TC6 和SM6 组小鼠的骨体积分数,骨小 梁厚度显著降低（P<0.05）,骨小梁间距显著增加（P<0.05）。骨小梁数量和皮质骨壁厚度没有显著性差异。3D 回 旋仪处理3 周后,与小鼠左心室后壁厚度变薄相比,其他参数没有变化。而在第6 周,舒张期和收缩期的左心室 内径变小,左心室质量变轻。结论：3D 回旋仪模拟微重力效应会导致小鼠骨质流失,影响心脏结构和功能,且具 有时间效应。     

原花青素联合胡椒碱通过五羟色胺受体途径改善慢性应激小鼠抑郁焦虑样行为

目的：探讨原花青素（OPC）联合胡椒碱（PIP）对慢性不可预知应激（CUMS）小鼠的抑郁焦虑样行为的作用,通过分析海马、前额叶皮层和下丘脑中5-HT1A受体的变化探讨相关机制。方法：将ICR小鼠分为正常组、CUMS组、CUMS+PIP（5 mg/kg）+OPC（12.5、25、50 mg/kg）组、CUMS+PIP（5 mg/kg）+OPC（50 mg/kg）+NAN-190（0.1 mg/kg）组、NAN-190组（CUMS+NAN-190 0.1 mg/kg）和氟西汀组（CUMS+氟西汀 10 mg/kg）,共8个组。CUMS建模后,采用强迫游泳、悬尾、新奇食物抑制摄食实验和大理石掩埋实验评估小鼠的抑郁和焦虑样行为,并采用高效液相色谱法测定海马、额叶皮层和下丘脑的单胺类神经递质含量[5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）和多巴胺（DA）]。结果：与正常组相比,CUMS组小鼠强迫游泳和悬尾实验中的不动时间显著增加（P＜0.01）,新奇食物抑制摄食潜伏期增加（P＜0.05）,大理石掩埋实验颗粒数增加（P＜0.01）;给予OPC（25、50 mg/kg）联合PIP（5 mg/kg）可改善由CUMS引起的抑郁焦虑样行为。通过高效液相色谱法发现,OPC（25、50 mg/kg）联合PIP（5 mg/kg）用药可显著逆转由CUMS引起的海马、额叶皮层和下丘脑中的5-HT水平下降（P＜0.05）,然而对NE、DA无影响（P＞0.05）。使用5-HT1A受体拮抗剂NAN-190（0.1 mg/kg）可逆转OPC和PIP的改善作用（P＜0.05）。结论：OPC和PIP联用可改善CUMS小鼠的抑郁焦虑样行为,这可能是通过激活中枢神经系统中的5-HT1A受体实现的。     

THSD4基因在小鼠间充质干细胞及MC3T3-E1细胞成骨分化中的作用

目的 探讨THSD4基因对小鼠间充质干细胞和MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。方法 提取绝经后骨质疏松症患者的骨髓间充质干细胞进行基因测序分析,与骨关节炎患者的骨髓间充质干细胞进行比较,分析基因表达差异。通过提取不同分化阶段的小鼠骨髓间充质干细胞（M-BMSC）及MC3T3-E1细胞的mRNA来检测THSD4 基因以及成骨分化的标志性基因（ALP、Runx2、Osx）的表达水平。通过构建慢病毒表达载体来实现对M-BMSC及MC3T3-E1细胞中THSD4的敲减及过表达,并观察其对M-BMSC及MC3T3-E1细胞成骨分化能力的影响。结果 THSD4基因在绝经后骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞中明显下调,且通过KEGG以及GO富集分析发现THSD4基因可能与PI3K-AKT信号通路及Wnt信号通路相关。随着成骨诱导分化时间的延长,THSD4 mRNA和成骨分化标志性基因（ALP、Runx2、Osx）mRNA在MC3T3-E1以及M-BMSC中表达量均逐渐增加。过表达THSD4可以增强MC3T3-E1细胞和M-BMSC的成骨分化能力,而敲减THSD4则减弱了MC3T3-E1细胞和M-BMSC的成骨分化能力。结论 THSD4基因在绝经后骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞中明显下调,且THSD4基因可以增强MC3T3-E1细胞以及M-BMSC的成骨分化能力。     

防己诺林碱对去卵巢小鼠骨代谢及骨微结构的影响

目的探讨防己诺林碱对去卵巢小鼠骨质疏松的保护作用。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为空白(假手术)对照组、模型(去卵巢)组、阳性(雌二醇,E2)对照组、防己诺林碱组共4组,每组10只。连续腹腔给药7周后处死小鼠,取股骨及外周血清,通过ELISA法检测骨代谢相关血清学指标:抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAc P)、I型胶原羧基末端肽(CTX)及I型胶原氨基末端肽(NTX);通过Micro-CT评估各组小鼠骨组织微结构相关指标:骨小梁百分比(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)和骨小梁厚度(Tb.Th);通过实时荧光定量PCR检测小鼠骨质疏松骨吸收相关基因的表达情况,包括TRAc P、组织蛋白酶K(Cathepsin K)、活化T细胞核因子1(NFATc1)以及降钙素受体(CTR)。结果与去卵巢模型组比较,防己诺林碱治疗组小鼠BV/TV、Tb.N、Tb.Th显著升高,Tb.Sp明显降低,骨代谢相关指标(TRAc P、CTX、NTX)显著降低,破骨细胞标志基因(TRAc P、Cathepsin K、NFATc1以及CTR)表达水平明显下降。结论防己诺林碱对去卵巢小鼠骨质疏松有保护作用,有望为骨质疏松的临床用药提供新思路。     

骨宝丸对维甲酸诱导小鼠骨质疏松的防治作用及机制探讨

目的研究骨宝丸对维甲酸诱导小鼠骨质疏松的防治作用,并探讨相关作用机制。方法将雌性BALB/c小鼠分为正常组(Control)、模型组(Model)以及骨宝丸高剂量组(GBW-H)、中剂量组(GBW-M)和低剂量组(GBW-L)。实验第1～30天,模型组和骨宝丸各剂量组小鼠灌服维甲酸(100 mg/kg)建立骨质疏松模型,同时骨宝丸各剂量组小鼠灌服药物溶液进行防治。实验结束后,取小鼠股骨,称取质量、测量股骨直径和股骨长度;利用HE染色法在光学显微镜下观察股骨组织变化;利用Micro-CT检测骨密度;采用ELISA试剂盒检测血清中BMP-2、OC、BALP、P1NP分泌水平。结果骨宝丸对维甲酸导致的小鼠股骨的质量、直径、骨密度和骨髓组织减少有防治作用,而且骨宝丸对维甲酸诱导小鼠血清OC和P1NP分泌增加、BALP和BMP-2分泌减少均有拮抗作用。结论骨宝丸可防治维甲酸诱导的小鼠骨质疏松,其作用机制可能与保护BMP-2分泌进而促进骨形成有关。     

肝细胞特异性HuR基因敲除小鼠模型的表型研究

目的 探讨肝细胞特异性敲除HuR基因对小鼠肝脏功能的影响。方法 从美国Jackson实验室引进LoxP标记的人抗原R（human antigen R,HuR）基因小鼠（HuR^fl/fl）和Alb-Cre转基因小鼠。杂交后,经数代选育配种,建立肝细胞特异性HuR基因敲除小鼠（HuR^LKO）模型。PCR技术鉴别小鼠基因型,蛋白免疫印迹和免疫荧光实验检验小鼠肝脏的HuR表达水平,同时HE染色观察肝脏结构变化。高脂喂养HuR^fl/fl/Alb-Cre和HuR^fl/fl两组小鼠,观察小鼠体重、肝重和肝体比变化,提取血清检测肝脏损伤和脂肪代谢相关指标。结果 PCR成功检测筛选子代小鼠基因型,包括HuR^fl/fl/Alb-Cre和HuR^fl/fl小鼠。蛋白免疫印迹实验和免疫荧光实验证明小鼠肝细胞特异性HuR基因敲除成功。HE染色结果提示HuR^LKO小鼠的肝细胞出现变性水肿、局部坏死。高脂喂养实验提示两组小鼠在肝重、肝体比、AST、ALT、HDL-C、血糖上的差异具有统计学意义（P＜0.05）,但在体重、TG、LDL-C的差异没有统计学意义（P＞0.05）。结论 HuR基因是维持小鼠肝细胞功能的必要基因,Cre-LoxP技术可成功构建HuR^LKO小鼠模型,且特异性高,表型明显,为研究HuR在肝脏各项疾病的发生发展中所扮演的角色,提供了一个很好的疾病模型。     

B6AF1雌性小鼠免疫性卵巢早衰模型建立

目的：本文主要研究自身免疫性卵巢早衰小鼠模型的建立和鉴定方法,为治疗和预防免疫性卵巢早衰提供实验基础。方法：将A/J雄鼠和C57BL/6雌鼠进行杂交繁殖B6AF1小鼠,筛选出B6AF1雌性小鼠,运用透明带多肽片段ZP3免疫B6AF1雌性小鼠,对阴道脱落细胞进行巴士染色,第14天结束造模,第7天和第14天分别进行模型鉴定。将卵巢进行H&E染色和ZP3免疫荧光染色,采用ELISA法检测小鼠血清中E₂和FSH的含量,来观察小鼠动情周期、卵巢组织形态学、抗透明带抗体免疫荧光和相关性激素的变化,评判免疫性卵巢早衰模型小鼠建立情况。结果：利用透明带ZP3多肽免疫B6AF1雌性小鼠14天,小鼠动情周期紊乱,卵巢组织有炎细胞浸润,卵巢中有明显透明带出现,血清中性激素E2含量下降和FSH含量上升,第7天上述变化不明显。结论：利用透明带多肽ZP3免疫B6AF1雌性小鼠14天,能够成功建立自身免疫性卵巢早衰模型,该模型发病率高,方法简单,能为免疫性卵巢早衰的研究提供基础。